SN/T 5336-2020 pdf download.猪瘟病毒及非洲猪瘟病毒检测 微流控芯片法.The English title is Detection of classical swine fever virus and african swine fever virus Microfluidic chip method.
1范围
本文件规定了猪瘟病毒及非洲猪瘟病毒的微流控芯片检测方法。
本文件适用于猪瘟病毒及非洲猪瘟病毒的检测。对于不能通过临床症状区分的疑似猪瘟病毒或非洲猪瘟病毒感染病例的样品，可通过本标准规定的方法进行鉴别检测
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文
件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T16551猪瘟诊断技术
GBT18648非洲猪瘟诊断技术
GB19489实验室生物安全通用要求
GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫
4原理
针对猪瘟病毒(CSFV)的5端非编码区和非洲猪瘟病毒(ASFV)的VP72基因的核酸序列设计引物，并将其分别固定在微流控芯片的相应位置后，对微流控芯片进行封装，将提取的核酸模板与反应液(包含 SYBR Green荧光染料)混合后，加到封装好的微流控芯片中，之后放入到带有离心功能恒温功能及实时荧光检测一体化的微流控芯片检测仪中，利用离心力驱动样品进入微流控芯片反应孔，进行反转录与恒温扩增。若样本中含有目的片段而得到恒温扩增，扩增产物将与荧光物质进行结合，通过荧光检测仪实时捕获荧光信号，直观反应扩增产物的产生，根据实时荧光信号的出现时间强度和位置，判断样本中是否含有CSFV、ASFV.
5试剂和材料
5.1试剂组分和存放条件见附录A。除非另有说明，在检测中所用的试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无核酸酶污染的容器分装。
7生物安全措施
71实验室设备、设施及废弃物处理等要求应符合GB19489的规定。
7.2微流控芯片的检测过程应符合国家有关生物安全规定。7.3检验过程中防止交叉污染的措施应符合GB/T27401的规定8试验方法
8.1样品
所有测试样品的采集和样品制备应按照GBT16551、GB18648的规定执行。8.2核酸提取
82.1核酸提取试剂
CSFV属于RNA病毒，ASFV属于DNA病毒，本文件以常规核酸提取试剂(可同时提取DNA和RNA)为例说明核酸提取步骤，也可采用GBT16551、B/T18648所规定的提取方法。为了确保核酸提取的准确可靠，每个测试样品提取时应做两个重复，在后续检测中两份核酸以同样的操作步骤实施检测8.2.2核酸提取纯化准备
裂解液如有沉淀，应于56℃温浴至沉淀完全溶解后使用
将蛋白酶充分混匀后，按照每管20μL分装至各离心管中。